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實時熒光PCR技術(shù)是目前應(yīng)用最為廣泛的核酸檢測技術(shù)。然而，由于主流熒光PCR儀器檢測通道數(shù)目的限制，單個反應(yīng)所能檢測的靶基因數(shù)目很難超過6個，限制了該技術(shù)在檢測涉及多靶點的復(fù)雜疾病上的應(yīng)用。

2月24日，廈門大學(xué)研究團(tuán)隊在《美國國家科學(xué)院院刊》(PNAS)雜志上發(fā)表了題為“Highly multiplex PCR assays by coupling the 5’-flap endonuclease activity of Taq DNA polymerase and molecular beacon reporters”的文章，研發(fā)出了一種稱為“MeltArray”的熒光PCR新技術(shù)，將熒光PCR的單管檢測能力提高了至少一個數(shù)量級。

該技術(shù)利用了熒光PCR反應(yīng)中Taq DNA聚合酶的5‘-瓣狀內(nèi)切酶活性，將位于引物下游的“媒介探針”切割，釋放出“媒介引物”，“媒介引物”結(jié)合到反應(yīng)體系中的分子信標(biāo)報告探針上。在Taq酶聚合活性作用下，“媒介引物”沿著分子信標(biāo)延伸，生成具有特定熔點值的熒光雙鏈。由于每個分子信標(biāo)可以允許多個“媒介引物”形成一系列具有不同熔點值的熒光雙鏈，單個MeltArray多重?zé)晒釶CR反應(yīng)可檢測的總靶基因數(shù)目就等于反應(yīng)中分子信標(biāo)數(shù)量乘以其所容納的“媒介引物”數(shù)量。研究團(tuán)隊實現(xiàn)了單個熒光通道可檢測12個靶標(biāo)，6個熒光通道的儀器可檢測72個靶標(biāo)，這是單個閉管實時熒光PCR一步法目前所能檢測的最大靶基因數(shù)量。

該研究證實了MeltArray多重?zé)晒釶CR技術(shù)在不改變現(xiàn)有儀器設(shè)備的情況，在遺傳病、傳染病和腫瘤的分子診斷上都有良好靈敏度和特異性，成功推動熒光PCR這一“老技術(shù)”再上“新臺階”，填補(bǔ)了長期存在于低階PCR和高通量檢測二者之間的技術(shù)空白。

來源：科技部生物中心

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